El virus de la leucosis aviar (ALV) es un virus ampliamente extendido que causa importantes pérdidas económicas a la industria avícola global. Este estudio tiene como objetivo investigar el efecto de la glucólisis en la replicación del virus ALV-J e identificar los principales ARN circulares que regulan la replicación del virus ALV-J. Encontramos que la captación de glucosa, el contenido de piruvato y el contenido de lactato en las células DF1 aumentaron después de la infección por ALV-J. Además, inhibir la glucólisis de las células DF1 infectadas por ALV-J redujo la replicación del virus ALV-J. Para estudiar más a fondo el mecanismo de la glucólisis en la replicación del virus ALV-J, realizamos secuenciación de ARN en células infectadas por ALV-J y células infectadas por ALV-J tratadas con inhibición de la glucólisis. Los resultados de la secuenciación de ARN muestran que se identificaron un total de 10,375 ARN circulares (circARN), de los cuales los principales tipos eran ARN circulares exónicos, y 28 circARN se expresaron diferencialmente entre las células infectadas por ALV-J y las células infectadas por ALV-J tratadas con inhibición de la glucólisis. Luego, realizamos un análisis de enriquecimiento funcional de los genes fuente y objetivo de circARN expresados diferencialmente. El análisis de enriquecimiento funcional indicó que algunos circARN podrían estar involucrados en la regulación de la replicación del virus ALV-J al influir en algunas vías como la glucólisis/gluconeogénesis, la vía de señalización de receptores tipo NOD, la vía de señalización MAPK, la vía de señalización p53, la vía de señalización de receptores tipo Toll, la vía de señalización de insulina y la apoptosis. Este estudio reveló el efecto de la glucólisis en la replicación del virus ALV-J en células DF1 y su posible mecanismo regulador, lo que proporciona una base para comprender los factores que influyen en la replicación del virus ALV-J y reducir la tasa de infección del virus ALV-J en aves de corral.