Los tumores de mastocitos (MCT) son los tumores cutáneos malignos más comunes en perros y presentan un comportamiento biológico extremadamente variable. La interacción entre RANK, RANK-L y los puntos de control inmunitarios se detecta con frecuencia en el microambiente tumoral y, juntos, participan en cada etapa del desarrollo del cáncer. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue caracterizar los perfiles moleculares de PD-L1, CTLA-4, la vía de señalización RANK/RANK-L y IFN- en tumores primarios y metástasis en ganglios linfáticos. Se sometieron a investigaciones inmunohistoquímicas diapositivas de MCT y ganglios linfáticos metastásicos de diez perros. Los resultados demostraron que el microambiente tumoral de los tumores de mastocitos de alto grado mostró una inmunotinción moderada o intensa de todas las proteínas, y las metástasis en ganglios linfáticos también mostraron una inmunotinción moderada o intensa de las proteínas de control. Además, los MCT mayores de 3 cm se asociaron con una intensificación de PD-L1 (= 0.03) en ganglios linfáticos metastásicos y reactividad inmunitaria de RANK-L (= 0.049) en el tumor. Además, los perros con un tiempo de supervivencia de menos de 6 meses mostraron una mayor reactividad inmunitaria de PD-L1 (= 0.042). En conclusión, el MCT de alto grado se asocia con un microambiente inmunosupresor que exhibe una señalización elevada de RANK/RANK-L y una mayor reactividad inmunitaria de puntos de control, lo que podría facilitar la evasión inmunitaria intratumoral. Estos biomarcadores muestran promesas como indicadores clínicos de progresión de la enfermedad y podrían responder a la inmunoterapia en perros con MCT de alto grado, enfatizando así su importancia para guiar las decisiones de tratamiento y mejorar los resultados.