El objetivo de esta investigación fue identificar y cuantificar compuestos biológicamente activos de las semillas de aguacate (L.) utilizando diferentes técnicas con el uso de ultrasonido (US), etanol (EtOH) y dióxido de carbono supercrítico (scCO) para posibles aplicaciones en (bio)medicina, farmacéutica, cosmética u otras industrias relevantes. Inicialmente, se llevó a cabo un estudio de la eficiencia del proceso, que reveló rendimientos en el rango del 2.96-12.11% en peso. La muestra obtenida con scCO resultó ser la más rica en fenoles totales (TPC) y proteínas totales (PC), mientras que la muestra obtenida con el uso de EtOH presentó el mayor contenido de proantocianidinas (PAC). El análisis fitoquímico de las muestras de AS, cuantificado por el método HPLC, indicó la presencia de 14 compuestos fenólicos específicos. Además, la actividad de las enzimas seleccionadas (celulasa, lipasa, peroxidasa, polifenol oxidasa, proteasa, transglutaminasa y superóxido dismutasa) fue cuantificada por primera vez en las muestras de AS. Utilizando la actividad de captura de radicales DPPH, se detectó el mayor potencial antioxidante (67.49%) en la muestra obtenida con EtOH. La actividad antimicrobiana se estudió utilizando el método de difusión en disco contra 15 microorganismos. Además, por primera vez, se cuantificó la efectividad antimicrobiana del extracto de AS mediante la determinación de las tasas de inhibición del crecimiento microbiano (MGIRs) a diferentes concentraciones del extracto de AS contra tres cepas de bacterias Gram-negativas, tres cepas de bacterias Gram-positivas y hongos. Los MGIRs y los valores de concentración mínima inhibitoria (MIC) se determinaron después de 8 y 24 horas de incubación, lo que permitió la evaluación de la eficacia antimicrobiana para posibles aplicaciones futuras de los extractos de AS como agentes antimicrobianos en (bio)medicina, farmacéutica, cosmética u otras industrias. Por ejemplo, el valor más bajo de MIC se determinó para después de 8 horas de incubación en el caso de los extractos de UE y SFE (70 g/mL), lo que indica un resultado excepcional y el potencial de los extractos de AS, ya que los valores de MIC para no se han investigado hasta ahora.