El burro de Miranda es una raza autóctona en peligro de extinción del norte de Portugal. Comprender las condiciones fisiológicas y patológicas del burro de Miranda es crucial para la conservación de la raza. Nuestro estudio tuvo como objetivo establecer intervalos de referencia (IR) para los parámetros de bioquímica sanguínea y evaluar la influencia del género y la edad en estos parámetros. Se analizaron muestras de sangre de 75 animales clínicamente sanos para 21 parámetros de bioquímica sanguínea utilizando Respons 920 y Start 4-Diagnostica-Stago. Los IR se calcularon de acuerdo con las directrices de la ASVCP, utilizando el software Reference Advisor V. 2.1 y el programa estadístico SPSS versión 29 para analizar los efectos del género y la edad. Se observaron diferencias significativas relacionadas con el género (< 0.05) en colesterol, cloro, creatinina (CREA), glucosa (GLU), sodio y triglicéridos (con valores más altos en hembras) y en aspartato aminotransferasa, creatina fosfoquinasa (CK), gamma-glutamil transferasa, potasio, magnesio (Mg) y urea (con valores más altos en machos). Se notaron diferencias relacionadas con la edad (< 0.05) para fosfatasa alcalina, CK, fibrinógeno, GLU y fósforo (más altos en animales jóvenes) y para globulina, Mg y proteína total (más altos en adultos). Los IR descritos aquí son invaluables para evaluar y monitorear el estado de salud de animales individuales y rebaños. Nuestro estudio destaca la importancia de considerar el género y la edad en la interpretación de los parámetros bioquímicos, proporcionando información crítica para la conservación y gestión de esta raza en peligro de extinción.