(No. CLST-01), un patógeno fúngico aislado de la flecha de tres hojas (L.), ha sido propuesto como un posible microrribicida para malas hierbas de gramíneas. Este artículo investigó los efectos fisiológicos y bioquímicos del extracto fúngico fitotóxico de acetato de etilo CLST-01 en las hojas de la flecha de tres hojas. Los resultados mostraron que el extracto fúngico de acetato de etilo de CLST-01 puede acelerar el daño a la membrana celular, aumentar la producción de malondialdehído y dañar la estructura celular, lo que podría disminuir el número de cloroplastos después de 96 horas de tratamiento. Además, el contenido de clorofila se redujo en un 49.5%, y la tasa de fotosíntesis neta, la conductancia estomática y la tasa de transpiración fueron inhibidas. Las tasas de inhibición fueron del 90.13%, 83.74% y 79.31%, respectivamente, y la concentración de CO intercelular aumentó en un 51.87% en el día 9 después del tratamiento con una concentración de 200 g/mL. En resumen, el extracto fúngico fitotóxico de acetato de etilo de CLST-01 puede inhibir la fotosíntesis de las hojas de la flecha de tres hojas, destruir la ultrastructura de las hojas y afectar el crecimiento de esta mala hierba invasora. Por lo tanto, tiene el potencial de ser desarrollado como un microrribicida para el control de malas hierbas en cultivos como un inhibidor natural de la fotosíntesis.