Los mecanismos subyacentes a la regeneración de raíces adventicias de novo aún se comprenden mal, particularmente en los árboles. Desarrollamos un sistema para estudiar el enraizamiento adventicio (AR) a niveles fisiológicos y moleculares utilizando hojas excisadas de microbrotes de castaño del mismo genotipo pero con dos orígenes ontogenéticos distintos que difieren en competencia de enraizamiento. Las hojas fueron tratadas con auxina y ácido N-1-naftilftalamico (NPA), un inhibidor del transporte polar de auxina (PAT). Los efectos fisiológicos se investigaron registrando las tasas de enraizamiento y el número y calidad de las raíces. Las respuestas moleculares se examinaron localizando y monitoreando los cambios en la expresión de un gen inducible por auxina en brotes juveniles y maduros durante el AR. La respuesta de enraizamiento de las hojas dependía de la etapa ontogenética y era similar a la de los microbrotes donantes. La iniciación de primordios radiculares y el desarrollo de raíces fueron inhibidos por la aplicación de NPA, aunque su efecto dependía del momento de la aplicación. La expresión del gen fue regulada al alza por la auxina solo en hojas competentes para enraizar durante la organogénesis de raíces de novo, y la expresión se redujo por NPA. El efecto inhibitorio sobre la expresión génica se detectó durante la reprogramación de células competentes para enraizar hacia iniciales de raíces en respuesta a la auxina, lo que indica que la regulación al alza mediada por PAT de este gen es necesaria en los pasos iniciales del AR en las hojas de castaño. La expresión localizada del gen en el centro de quiescencia (QC) también sugiere un papel para este gen en el mantenimiento de la competencia meristemática y el patrón radial de las raíces.