La mastitis bovina es una inflamación de la glándula mamaria en respuesta a la invasión de agentes oportunistas. Debido a la alta importancia económica de la producción lechera y la complejidad relacionada con la salud animal, el objetivo de este trabajo fue identificar y evaluar el perfil de resistencia antibacteriana de muestras de leche con mastitis, mano de ordeño y equipos de ordeño de pequeñas granjas lecheras rurales pertenecientes a la región noroeste del estado de Paraná, Brasil. Se seleccionaron cinco pequeñas granjas lecheras no técnicas en los municipios de Boa Esperança, Juranda y Tapejara, todas pertenecientes a la región noroeste del estado de Paraná, Brasil. Las propiedades tenían rebaños de Holstein y/o mestizos, realizaban un sistema de ordeño de cubo a pie y todas tenían la presencia de animales con mastitis subclínica confirmada por la Prueba de Mastitis de California. Se recolectaron muestras de hisopos estériles de los insufladores de ordeño, la mano de ordeño y muestras de leche; posteriormente, se realizaron pruebas de aislamiento y caracterización fenotípica de las muestras, pruebas de sensibilidad a antimicrobianos y pruebas fenotípicas para la detección de cepas productoras de beta-lactamasa de espectro extendido (ESBL), identificación molecular de los aislados y búsqueda del gen A. De las 199 muestras recolectadas de las 15 propiedades seleccionadas en los municipios de Boa Esperança, Tapejara y Juranda, 72 (36.20%) fueron clasificadas como multirresistentes. Aislados de las manos de los ordeñadores y de las máquinas de ordeño, que producen fenotípicamente beta-lactamasa de espectro extendido (ESBL), también se observó la presencia del gen A en 11 aislados de spp. de muestras de leche, máquinas y manos de ordeño. La mastitis puede propagarse al rebaño a través del proceso de ordeño por los instrumentos y manos de los ordeñadores, y medidas de manejo adecuadas pueden prevenir su transmisión, y el uso consciente de antibióticos disminuye la prevalencia de patógenos multirresistentes. En este trabajo, se detectaron diferentes bacterias patógenas en leche mastítica, equipos de ordeño y mano de ordeño con un alto porcentaje (36.20%) de aislados clasificados como multirresistentes. Además, se verificó la presencia fenotípica (ESBL) y molecular (gen A) de aislados portadores de genes de resistencia. Estos resultados reflejan directamente en la salud de los animales, la salud de los trabajadores y la salud del respectivo entorno, lo que puede permitir la continuidad de la propagación de los agentes etiológicos involucrados en la infección por mastitis. La concienciación de los productores y trabajadores de estas propiedades sobre la enfermedad, la transmisión, los aspectos sanitarios y el manejo y tratamiento adecuados son esenciales para mejorar la producción de leche y la eficiencia productiva.