El tratamiento de vacas secas con un antibiótico intramamario se recomienda para reducir el riesgo de mastitis al inicio de la próxima lactancia. El período seco puede acortarse de manera involuntaria, afectando la eliminación de residuos de antibióticos y el tiempo en que los residuos alcanzan concentraciones por debajo del límite máximo de residuos (LMR). El objetivo de este estudio fue evaluar la eliminación de residuos en la leche después del tratamiento de vacas secas con cloxacilina, considerando períodos secos de 14 (G14d), 21 (G21d) y 28 días (G28d). En total, se incluyeron quince vacas con 60 cuartos mamarios en el estudio. Para cada vaca, tres de los cuartos mamarios fueron tratados con 1000 mg de cloxacilina benzatina (2:1) en el día 252, día 259 y día 266 de gestación; un cuarto se dejó sin tratar. Se tomaron muestras de leche hasta 20 DIM y se analizaron la composición de la leche, el recuento de células somáticas y los residuos de cloxacilina. El HPLC-MS/MS reveló diferentes cinéticas de excreción para los compuestos cloxacilina y cloxacilina benzatina (1:1). Todas las vacas mostraron una concentración de cloxacilina y cloxacilina benzatina (1:1) por debajo del LMR de 30 ug/kg después de 5 días. En los cuartos mamarios de G21d y G28d, la concentración de cloxacilina ya estaba por debajo del LMR en la primera ordeña después del parto. La concentración de cloxacilina benzatina (1:1) en la leche de G28d, G21d y G14d cayó por debajo de 30 ug/kg en el 5º, 3º y 5º DIM, respectivamente. Acortar el período seco afecta la eliminación de residuos después del tratamiento de vacas secas con cloxacilina. Sin embargo, el riesgo de exceder el LMR parece bajo, incluso con períodos secos más cortos de 14 días.