La hepatitis E causada por el virus HEV de los genotipos HEV-3 y HEV-4 es una enfermedad zoonótica transmitida por alimentos que se propaga en todo el mundo. Actualmente, el HEV se clasifica en ocho genotipos diferentes (HEV-1-8). Los genotipos HEV-3 y HEV-4 son zoonóticos y se dividen en subtipos. La mayor parte de la información sobre la replicación del HEV sigue siendo desconocida debido a la falta de un sistema de cultivo celular eficiente. En los últimos años, se han desarrollado varios protocolos para el cultivo de HEV en diferentes líneas celulares; aunque fueron problemáticos, largos y escasamente reproducibles, ofrecieron la oportunidad de estudiar el ciclo replicativo del virus. En el presente estudio, nuestro objetivo fue obtener un protocolo listo para usar con un stock viral en medio libre de suero que pueda utilizarse con un tiempo de crecimiento reducido y sin pasos de purificación. El método empleado permitió la aislamiento y adaptación celular de cuatro cepas de HEV-3 porcino, pertenecientes a tres subtipos diferentes. Los análisis filogenéticos realizados sobre secuencias genómicas parciales de cepas aisladas in vitro no revelaron ninguna inserción en la región hipervariable (HVR) de los genomas. Se adquirió un número limitado de mutaciones en el genoma durante el crecimiento del virus en las secuencias parciales de los genes codificadores de Metiltransferasa (Met) y ORF2.