Remodelación de lipoproteínas mediada por ApoA-I monitoreada con un fosfolípido fluorescente
Autores: Neufeld, Edward B.; Sato, Masaki; Gordon, Scott M.; Durbhakula, Vinay; Francone, Nicolas; Aponte, Angel; Yilmaz, Gizem; Sviridov, Denis; Sampson, Maureen; Tang, Jingrong; Pryor, Milton; Remaley, Alan T.
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2019
Acceso abierto
Artículo científico
2019
Remodelación de lipoproteínas mediada por ApoA-I monitoreada con un fosfolípido fluorescente
Categoría
Ciencias Naturales y Subdisciplinas
Subcategoría
Biología
Palabras clave
Lipoproteína
Colesterol
Apolipoproteína
Fluorescente
HDL
ApoA-I
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 13
Citaciones: Sin citaciones
Describimos métodos simples, sensibles y robustos para monitorear la remodelación de lipoproteínas y el intercambio de colesterol y apolipoproteínas, utilizando fosfatidiletanolamina (*PE) marcada con el grupo cabeza fluorescente Lissamina Rodamina B como un marcador de referencia de lipoproteínas. El colesterol fluorescente Bodipy (*Chol) y *PE se incorporaron directamente en lipoproteínas plasmáticas completas en proporción a la masa de colesterol y fosfolípidos de las lipoproteínas, respectivamente. *Chol, pero no *PE, se intercambió pasivamente entre lipoproteínas plasmáticas aisladas. La apoA-I fluorescente (*apoA-I) se unió específicamente a lipoproteínas de alta densidad (HDL) y remodeló vesículas sintéticas de lipoproteínas-X etiquetadas con *PE y *Chol en una partícula similar a HDL pre-beta que contenía *PE, *Chol y *apoA-I. El *PE derivado de MLV fluorescente se incorporó específicamente en HDL plasmático, mientras que la incorporación de *Chol derivado de MLV en lipoproteínas plasmáticas fue similar a la incorporación directa de *Chol, consistente con la remodelación mediada por apoA-I de MLV fluorescente a HDL con el intercambio concomitante de *Chol entre lipoproteínas. Basado en estos hallazgos, desarrollamos un sistema modelo para estudiar la transferencia de lípidos depositando *PE fluorescente y *Chol etiquetado en cristales de silicato de calcio hidratado, formando partículas donantes densas recubiertas de lípidos que se separan fácilmente de las partículas de lipoproteínas aceptadoras mediante centrifugación a baja velocidad. Se demostró que la transferencia de *PE de partículas donantes a lipoproteínas plasmáticas de ratón era específica de HDL y dependiente de apoA-I. La transferencia de *PE y *Chol de partículas donantes a HDL en plasma humano completo estaba altamente correlacionada. En conjunto, estos estudios sugieren que el eflujo de *PE libre de células monitorea la funcionalidad de apoA-I.
Descripción
Describimos métodos simples, sensibles y robustos para monitorear la remodelación de lipoproteínas y el intercambio de colesterol y apolipoproteínas, utilizando fosfatidiletanolamina (*PE) marcada con el grupo cabeza fluorescente Lissamina Rodamina B como un marcador de referencia de lipoproteínas. El colesterol fluorescente Bodipy (*Chol) y *PE se incorporaron directamente en lipoproteínas plasmáticas completas en proporción a la masa de colesterol y fosfolípidos de las lipoproteínas, respectivamente. *Chol, pero no *PE, se intercambió pasivamente entre lipoproteínas plasmáticas aisladas. La apoA-I fluorescente (*apoA-I) se unió específicamente a lipoproteínas de alta densidad (HDL) y remodeló vesículas sintéticas de lipoproteínas-X etiquetadas con *PE y *Chol en una partícula similar a HDL pre-beta que contenía *PE, *Chol y *apoA-I. El *PE derivado de MLV fluorescente se incorporó específicamente en HDL plasmático, mientras que la incorporación de *Chol derivado de MLV en lipoproteínas plasmáticas fue similar a la incorporación directa de *Chol, consistente con la remodelación mediada por apoA-I de MLV fluorescente a HDL con el intercambio concomitante de *Chol entre lipoproteínas. Basado en estos hallazgos, desarrollamos un sistema modelo para estudiar la transferencia de lípidos depositando *PE fluorescente y *Chol etiquetado en cristales de silicato de calcio hidratado, formando partículas donantes densas recubiertas de lípidos que se separan fácilmente de las partículas de lipoproteínas aceptadoras mediante centrifugación a baja velocidad. Se demostró que la transferencia de *PE de partículas donantes a lipoproteínas plasmáticas de ratón era específica de HDL y dependiente de apoA-I. La transferencia de *PE y *Chol de partículas donantes a HDL en plasma humano completo estaba altamente correlacionada. En conjunto, estos estudios sugieren que el eflujo de *PE libre de células monitorea la funcionalidad de apoA-I.