Los hongos endófitos son recursos microbianos importantes en la agricultura y la ganadería. Debido a su simbiosis estable, transmisión de especies y efectos positivos en las plantas huésped, el uso de hongos endófitos en la mejora de pastos es de gran importancia. En este estudio, se utilizaron seis métodos de inoculación, incluyendo el método de inoculación por hendidura en plántulas estériles, el método de inoculación por corte en plántulas estériles, el método de inoculación por inyección en plántulas estériles, el método de inoculación por remojo de semillas, el método de inoculación por perforación y luego remojo de semillas, y el método de inoculación por hendidura en semillas. Se utilizó espectrometría para construir nuevos simbiontes, y se utilizó cromatografía líquida-espectrometría de masas para analizar los efectos de los hongos endófitos en el metabolismo de nuevos huéspedes. Se estudió la respuesta fisiológica de los nuevos simbiontes al estrés salino y alcalino mediante un experimento en macetas. Los resultados fueron los siguientes: En este estudio, se inoculó con éxito a través del método de inoculación por hendidura en plántulas estériles, y se obtuvieron nuevos simbiontes (EI); la tasa de vacunación fue del 2.1%. Los metabolitos regulados al alza por EI están significativamente enriquecidos en el ciclo del citrato y el metabolismo del ácido ascórbico y aldárico, lo que sugiere que la simbiosis de los hongos endófitos desencadena indirectamente la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) a través de múltiples vías metabólicas. La prueba de estrés salino-alcalino mostró que el sistema antioxidante del huésped estaba activo después de la inoculación, y la capacidad antioxidante total se incrementó significativamente en comparación con los no simbiontes (EF) bajo estrés leve (< 0.05), lo que proporcionó pistas importantes para revelar el complejo mecanismo de la simbiosis planta-hongo. Este estudio proporciona orientación práctica y una base teórica para la adaptación de las plantas ante el cambio climático, la gestión de la salud de las semillas de pasto y la mejora del suelo a través de hongos endófitos.