El conocimiento preciso de todos los aspectos que controlan la cultura de tejidos vegetales y la regeneración de plantas in vitro es crucial para los biotecnólogos vegetales y su industria correlacionada, ya que hay una creciente demanda de este conocimiento científico, lo que resulta en plantas más productivas y resilientes en el campo. Sin embargo, el desarrollo y la aplicación de técnicas de cultivo celular y de tejidos suelen basarse en estudios empíricos, aunque existen algunos modelos basados en datos. En general, el éxito de la cultura de tejidos vegetales depende de varios factores, como los nutrientes disponibles, la síntesis endógena de auxinas, los compuestos orgánicos y las condiciones ambientales. En esta revisión, se describen uno a uno los aspectos más importantes, con algunas recomendaciones prácticas basadas en la investigación básica en fisiología vegetal y compartiendo nuestra experiencia práctica de más de 20 años de investigación en este campo. El objetivo principal es ayudar a los nuevos biotecnólogos vegetales y aumentar el impacto de la industria de la cultura de tejidos vegetales en todo el mundo.