El magnesio y sus aleaciones representan candidatos prometedores para implantes biomédicos debido a su biodegradabilidad y propiedades mecánicas, que son similares a las del hueso natural. Sin embargo, su rápido proceso de degradación, caracterizado por fluctuaciones dinámicas de pH y una significativa evolución de gas hidrógeno durante la biocorrosión, afecta negativamente tanto las evaluaciones in vitro como in vivo. Si bien las normas ISO 10993-5 y 12 proporcionan pautas para evaluar la biocompatibilidad in vitro de materiales biodegradables, también introducen condiciones de variabilidad en las pruebas que generan resultados inconsistentes. Para abordar estas características inherentes de las aleaciones de Mg, es esencial desarrollar métodos mejorados que simulen con precisión el entorno fisiológico para las pruebas de biocompatibilidad in vitro. Este estudio presenta dos enfoques de extracción novedosos para evaluar aleaciones de Mg: una solución tamponada que utiliza PBS/DMEM con diluciones cuaternarias y un protocolo estándar ISO modificado que emplea dilución decuple de extractos convencionales no tamponados. Los hallazgos actuales establecen que la optimización controlada de las condiciones de extracción, específicamente la composición del tampón y los parámetros de dilución, permite una evaluación confiable de la citotoxicidad in vitro de las aleaciones de Mg, proporcionando una metodología robusta que avanza la evaluación preclínica de estos prometedores materiales biodegradables.