Para la cuantificación de la actividad de la insulina, el capítulo general de la Farmacopea de los Estados Unidos (USP) continúa requiriendo la prueba de azúcar en sangre en conejos. Para nuevos compuestos de insulina o análogos de insulina, se esperan esos datos cuantitativos para estudios de estabilidad o comparabilidad. En Sanofi, se utilizaron muchos conejos para cumplir con los requisitos de la autoridad y obtener datos cuantitativos de bioactividad de insulina hasta que la prueba in vivo fue reemplazada. Con el fin de demostrar la comparabilidad entre los sistemas de prueba in vivo e in vitro, este estudio fue diseñado para demostrar equivalencia. La medición de lotes de sustancia activa y producto farmacéutico de insulina lispro e insulina glargina, incluyendo muestras de estrés (diluidas o después de un estrés térmico de 30 minutos a 80 grados C), reveló una clara correlación entre los resultados de las pruebas in vitro e in vivo. La recuperación de los resultados cuantitativos in vitro en Western en célula (ICW) en comparación con los resultados de la prueba in vivo estuvo dentro de los límites de aceptación predefinidos del 80% al 125%. Así, el ensayo bioquímico basado en células ICW in vitro conduce a resultados que son equivalentes a la prueba de azúcar en sangre en conejos según la USP, y es altamente adecuado para la cuantificación de la actividad de la insulina. Para compuestos de desarrollo futuros, el ensayo basado en células Western in vitro puede reemplazar la prueba de azúcar en sangre en conejos requerida por la USP.