Los transportadores de aminoácidos heterodiméricos (HATs) son complejos proteicos compuestos por dos subunidades, una pesada y una ligera pertenecientes a las familias de transportadores de solutos (SLC) SLC3 y SLC7. Los HATs transportan aminoácidos y sus derivados a través de la membrana plasmática. El HAT humano 4F2hc-LAT1 está compuesto por la glicoproteína N de membrana tipo II 4F2hc (SLC3A2) y el transportador de aminoácidos tipo L LAT1 (SLC7A5). 4F2hc-LAT1 es relevante desde el punto de vista médico, y su disfunción y sobreexpresión están asociadas con el autismo y la progresión tumoral. Aquí proporcionamos un protocolo general aplicable sobre cómo buscar el mejor clon que exprese la proteína de transporte de membrana en términos de cantidad y función utilizando como huésped de expresión. Además, describimos un procedimiento de sobreexpresión y purificación para la producción del HAT 4F2hc-LAT1. El complejo heterodimérico aislado es puro, ensamblado correctamente, estable, se une al sustrato L-leucina y, por lo tanto, está correctamente plegado. Por lo tanto, esta muestra recombinante humana derivada de 4F2hc-LAT1 puede ser utilizada para caracterizaciones bioquímicas y biofísicas posteriores.