Este estudio tuvo como objetivo ampliar el conocimiento sobre la actividad y el modo de acción del CHI en la metanogénesis y las poblaciones microbianas del rumen in vivo. Un total de 16 vacas lecheras en lactancia fueron distribuidas en dos grupos, uno de los cuales recibió 135 mg de CHI/kg de peso corporal diariamente. Se determinó el efecto sobre el rendimiento productivo, la composición de la leche, la eficiencia de fermentación, las emisiones de metano, la síntesis de proteínas microbianas y las comunidades microbianas ruminales. La suplementación con CHI no afectó la diversidad microbiana del rumen, pero aumentó la abundancia relativa (AR) de las bacterias y disminuyó la de los ciliados y protozoos del rumen, lo que resultó en un cambio hacia una menor proporción de ácido acético a propiónico. Sin embargo, no se observó efecto en el rendimiento de leche ni en la intensidad de metano. En conclusión, la suplementación con 135 mg de CHI/kg de peso corporal aumentó la AR y disminuyó la de ciliados y protozoos del rumen, ambos relacionados con la degradación de fibra en el rumen de diferentes maneras, y resultó en un cambio de la fermentación ruminal hacia proporciones más altas de propionato, sin afectar las emisiones de CH, el rendimiento de leche o la composición de la leche. Se necesitarían más investigaciones con dosis más altas para evaluar el uso potencial de este aditivo como inhibidor de metano.