Las nanopartículas de quitosano (CsNPs) son polímeros naturales biocompatibles, biodegradables y no tóxicos a bajas concentraciones, con diversas aplicaciones en la cultura de tejidos vegetales in vitro. Este estudio tiene como objetivo evaluar el efecto de los CsNPs durante la multiplicación in vitro de caña de azúcar ( spp.) utilizando biorreactores de inmersión temporal. Se evaluaron los CsNPs a concentraciones de 0, 25, 50, 100 y 200 mg L en medio de cultivo líquido de Murashige y Skoog. Después de cuatro semanas de cultivo, se evaluaron el porcentaje de respuesta, el número de brotes por explante, la longitud de los brotes, el número de hojas por explante, la materia seca, el contenido de clorofila, el contenido de -caroteno, la peroxidación lipídica, el contenido fenólico, el contenido de peróxido de hidrógeno y la capacidad antioxidante. Los resultados mostraron que los porcentajes de respuesta más altos se obtuvieron en los tratamientos con 0, 25 y 50 mg L de CsNPs, mientras que los porcentajes de respuesta más bajos se obtuvieron en los tratamientos con 100 y 200 mg L de CsNPs. Las concentraciones de 25 y 50 mg L de CsNPs promovieron el crecimiento y la diferenciación celular, mientras que 100 y 200 mg L de CsNPs lo inhibieron. El contenido de clorofila aumentó con 25 y 50 mg L-1 de CsNPs, mientras que el contenido de -caroteno aumentó con 100 y 200 mg L de CsNPs. La peroxidación lipídica y la capacidad antioxidante aumentaron con el incremento de las concentraciones de CsNP. El contenido fenólico aumentó con 100 mg L de CsNPs, mientras que el contenido de peróxido de hidrógeno disminuyó con el aumento de las concentraciones de CsNP. En conclusión, los CsNPs son una alternativa para estimular el crecimiento y la diferenciación de tejidos durante la multiplicación in vitro de caña de azúcar.