Ranibizumab es un fragmento Fab bioterapéutico utilizado para el tratamiento de la degeneración macular relacionada con la edad y el edema macular. Se expresa actualmente en la bacteria gramnegativa. Sin embargo, los bajos niveles de expresión resultan en un alto costo de fabricación. La expresión de la proteína puede aumentarse manipulando los requisitos nutricionales (fuente de carbono, fuente de nitrógeno, agente tampón), los parámetros del proceso (pH, concentración del inductor, agitación, temperatura) y la composición genética de la cepa productora. Además, comprender el impacto de estos factores en la calidad del producto es un requisito según los principios de Calidad por Diseño (QbD). En este documento, examinamos el efecto de varios componentes de medios y parámetros del proceso en el nivel de expresión y calidad del biofármaco. En primer lugar, se realizó un análisis de riesgos para seleccionar diferentes componentes de medios basados en la literatura. A continuación, se realizaron experimentos para evaluar estos componentes. Se identificaron ocho componentes para una investigación adicional y se examinaron para determinar su efecto e interacciones utilizando un diseño experimental factorial fraccional. Se encontró que la sacarosa, la biotina y el pantotenato tenían el máximo efecto durante la producción del Fab. Además, se observaron las interacciones más significativas con cianocobalamina, glutatión y biotina-glutatión. La identificación del producto se realizó con Cromatografía líquida-Espectrometría de masas (LC-MS), el nivel de expresión se cuantificó utilizando Interferometría de capa biológica, HPLC de fase inversa y SDS-PAGE, y la calidad del producto se midió mediante RP-HPLC. En general, se logró una mejora de cinco veces del título de la proteína objetivo (de 5 mg/L a 25 mg/L) utilizando los componentes de medios evaluados en comparación con el medio basal, demostrando así la eficacia del enfoque sistemático propuesto por QbD.