Mal d 1 es el principal alérgeno de la manzana en el norte de Europa. Para explicar las diferencias en la alergenicidad de las variedades de manzana, es esencial estudiar sus propiedades e interacción con otros fitoquímicos, que podrían modular el potencial alergénico. Por lo tanto, se desea una ruta de producción optimizada seguida de un paso de purificación poco sofisticado para Mal d 1 y los respectivos mutantes para producir cantidades suficientes. Se describe un procedimiento para la transformación del plásmido en células competentes, la expresión de proteínas y la purificación rápida en un solo paso. r-Mal d 1 con y sin una etiqueta de polihistidina se purifican mediante cromatografía de afinidad de iones metálicos inmovilizados (IMAC) y cromatografía de líquidos de proteínas rápidas (FPLC) utilizando una columna de intercambio iónico de alta resolución, respectivamente. La pureza se estima por SDS-PAGE utilizando un programa de procesamiento de imágenes (Fiji). Para ambos mutantes se logra un rendimiento apropiado de r-Mal d 1 con una pureza superior al 85%. El alérgeno se caracteriza después de la digestión en gel con tripsina mediante análisis de péptidos utilizando HPLC-MS/MS. Los elementos de estructura secundaria se calculan en base a la espectroscopía de CD y se confirma el impacto insignificante de la etiqueta de polihistidina en el plegamiento. La formación de dímeros se comprueba mediante espectrometría de masas y reducción por DTT antes de SDS-PAGE. Además, se investiga el impacto del proceso de congelación y descongelación, la liofilización y el almacenamiento en la formación de dímeros.