La cepa RH, altamente virulenta, se mantiene a través de pasajes sucesivos en ratones, pero aún falta estudios que refinen estos procedimientos desde una perspectiva de las 3Rs, donde los ideales humanitarios buscan minimizar el estrés, el dolor o el sufrimiento de los animales utilizados en la investigación sin perder resultados. El objetivo de este estudio fue establecer puntos finales humanitarios en ratones Swiss Webster inoculados con la cepa RH. Un total de 52 ratones fueron infectados con 5 x 10 tachizoítos/mL y se monitorearon durante períodos de hasta 5 días. Se registraron diariamente en tablas de puntuación los parámetros de peso corporal; condición del pelaje; temperatura corporal superior a la normal; hipotermia; función respiratoria; dolor; heces blandas o diarrea; diarrea con sangre; tensión, nerviosismo o angustia durante el manejo; y ascitis. Los resultados mostraron que la piloerección prominente, la función respiratoria, los parámetros de dolor y la ascitis son signos clínicos importantes que deben utilizarse como punto de corte para implementar la eutanasia. La aplicación de este método de refinamiento ayudó a evitar el sufrimiento y el dolor de los animales sin comprometer el número de parásitos recuperados. Por lo tanto, sugerimos adoptar estos parámetros en los protocolos de investigación que requieren el mantenimiento de la cepa RH en modelos murinos para evitar y reducir el sufrimiento animal.