El objetivo de este estudio fue investigar el efecto de la punicalagina, un antioxidante, en la calidad del esperma de carneros. Se recolectaron y agruparon muestras de semen de cinco carneros, luego se diluyeron utilizando un diluyente a base de Tris que contenía varias concentraciones (0, 5, 15, 30 y 45 M) de punicalagina. Se midieron y analizaron la motilidad espermática, la integridad de la membrana plasmática, la integridad del acrosoma, la capacidad antioxidante total (TAC), las especies reactivas de oxígeno (ROS), el malondialdehído (MDA), el potencial de membrana mitocondrial (MMP), la superóxido dismutasa (SOD) y la catalasa (CAT) durante el almacenamiento líquido a 4 grados C. Los resultados mostraron que la solución a base de Tris que contenía punicalagina mejoró la motilidad espermática, la integridad de la membrana plasmática, la integridad del acrosoma, el TAC, la SOD, la CAT y el MMP, y disminuyó el contenido de ROS y MDA. Al mismo tiempo, la muestra de semen diluida con la solución a base de Tris suplementada con 30 M de punicalagina logró el mejor efecto. La motilidad total de los espermatozoides, la motilidad progresiva, la integridad de la membrana plasmática, la integridad del acrosoma, el TAC, la SOD, la CAT y el MMP del grupo suplementado con 30 M de punicalagina fueron significativamente ( < 0.05) más altos que los de los otros grupos en el quinto día durante el almacenamiento líquido a 4 grados C. Mientras tanto, el contenido de ROS y el contenido de MDA fueron significativamente ( < 0.05) más bajos que los de los otros grupos. En conclusión, se determinó que la concentración óptima de punicalagina en el diluyente de semen de carnero era de 30 M. Los resultados indicaron que un diluyente suplementado con punicalagina podría mejorar la calidad del esperma de carnero preservado a 4 grados C al aumentar la capacidad antioxidante, el potencial mitocondrial y reducir el estrés oxidativo.