El óxido nítrico (NO) juega un papel significativo en la resistencia de las plantas a la sequía. Sin embargo, los efectos de la aplicación exógena de NO a los cultivos bajo estrés por sequía varían dentro y entre especies. En este estudio, exploramos la influencia del nitroprusiato de sodio (SNP) exógeno en la resistencia a la sequía de las hojas de soja en la etapa de plena floración utilizando dos variedades: HN44, tolerante a la sequía, y HN65, no tolerante a la sequía. La pulverización de SNP en las hojas de soja durante el período de plena floración bajo estrés por sequía mejoró el contenido de NO en las hojas de soja. Las actividades de la nitrito reductasa (NiR) y la nitrato reductasa (NR) en las hojas se vieron afectadas por la inhibición de NO. La actividad de las enzimas antioxidantes en las hojas aumentó con la extensión del tiempo de aplicación de SNP. Los contenidos de sustancias osmorreguladoras, incluyendo prolina (Pro), azúcar soluble (SS) y proteína soluble (SP) aumentaron gradualmente con la extensión del tiempo de aplicación de SNP. El contenido de malondialdehído (MDA) disminuyó a medida que aumentaba el contenido de NO, reduciendo así el daño al sistema de membranas. En general, la pulverización de SNP redujo el daño y mejoró la capacidad de la soja para hacer frente a la sequía. Este estudio exploró los cambios fisiológicos de la soja SNP bajo estrés por sequía y proporcionó una base teórica para mejorar el cultivo resistente a la sequía de la soja.