El tigre de Bengala está en peligro crítico de extinción, por lo que las tecnologías de reproducción asistida, incluida la inseminación artificial, son herramientas de conservación importantes. Para los felinos salvajes y domésticos, la electroeyaculación (EE) es el método de recolección de semen más común, con protocolos optimizados para obtener cantidades suficientes de esperma viable para la inseminación artificial. Sin embargo, se ha prestado menos atención a garantizar el bienestar animal durante el proceso. Este estudio examinó los efectos de tres protocolos de EE (Bajo, 2-5 voltios; Medio, 3-6 voltios; Alto, 4-7 voltios) sobre la calidad del semen, el tamaño testicular, la testosterona sérica, la creatina quinasa (CK) y las concentraciones de malondialdehído (MDA), así como el cortisol sérico como un indicador de estrés. Se recolectaron muestras de sangre antes, durante y después de cada serie de EE. Se evaluaron el pH del plasma seminal, y la motilidad, viabilidad y morfología de los espermatozoides después de cada procedimiento. También se determinaron las concentraciones de MDA en el plasma seminal y en el pellet de espermatozoides. Las anomalías primarias de los espermatozoides y el MDA en el plasma seminal fueron más altas en el grupo de voltaje Bajo en comparación con los grupos de voltaje Medio y Alto. La CK sérica en el grupo de voltaje Alto aumentó durante la serie de EE, lo que sugiere el potencial de daño muscular. Sin embargo, no se observaron cambios significativos en las concentraciones de cortisol, testosterona o MDA en suero. Los resultados sugieren que el protocolo de voltaje Medio produjo muestras de buena calidad a voltajes más bajos que el protocolo Alto sin efectos negativos en la función muscular, lo que podría ser mejor para el bienestar animal.