Un protocolo de extracción de proteínas de semillas individuales para caracterizar las proteínas de almacenamiento de semillas de Brassica
Autores: Rahman, Mahmudur; Liu, Lei; Barkla, Bronwyn J.
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2021
Acceso abierto
Artículo científico
2021
Un protocolo de extracción de proteínas de semillas individuales para caracterizar las proteínas de almacenamiento de semillas de Brassica
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Agronomía y Ciencia de los Cultivos
Palabras clave
Aceite de colza
Extracción de proteínas
Proteínas de almacenamiento de semillas
Método de aislamiento
Optimización
Extracción de proteína de una sola semilla
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 45
Citaciones: Sin citaciones
La torta de expulsor de aceite de colza extraído contiene principalmente proteínas. Se han utilizado varios enfoques para aislar, detectar y medir proteínas en semillas de colza, centrándose particularmente en las proteínas de almacenamiento de semillas (SSP). Para maximizar el rendimiento de proteínas y minimizar el uso de productos químicos peligrosos, los costos de aislamiento y la pérdida de material de semilla, la optimización del método de extracción es fundamental. Para algunos estudios, también es necesario minimizar o evitar la contaminación cruzada de semilla a semilla para la fenotipificación y el análisis de un solo tipo de tejido para conocer la cantidad exacta de cualquier componente bioactivo en una sola semilla, en lugar de una mezcla de varias semillas. Sin embargo, no existe un método simple y robusto para la extracción de proteínas de una sola semilla de colza (SRPE). Para establecer una estrategia para optimizar SRPE para el análisis de proteínas basado en gel, obteniendo la mayor cantidad de SSP de la manera más económica y rápida, se probaron una variedad de enfoques diferentes, incluidas variaciones en los pasos de pulverización de semillas, cambios en las composiciones de solventes y reactivos y ajustes a los pasos de recuperación de proteínas. Después de SRPE, se utilizó SDS-PAGE 1D para evaluar la calidad y cantidad de proteínas extraídas. Se desarrolló un procedimiento SRPE estandarizado y luego se probó para el rendimiento y la reproducibilidad. El mayor rendimiento y calidad de proteínas se obtuvieron utilizando un molinillo de bolas con cuentas de acero inoxidable en tubos de microcentrífuga Safe-Lock con metanol como solvente, lo que proporciona un método altamente eficiente, económico y efectivo. La utilidad de este SRPE se validó aplicando el procedimiento para extraer proteínas de diferentes semillas oleaginosas de Brassica y para el cribado de una población mutante de etil metano sulfonato (EMS) de R-0-18. Los resultados proporcionan una metodología útil para identificar y caracterizar las SSP en el SRPE.
Descripción
La torta de expulsor de aceite de colza extraído contiene principalmente proteínas. Se han utilizado varios enfoques para aislar, detectar y medir proteínas en semillas de colza, centrándose particularmente en las proteínas de almacenamiento de semillas (SSP). Para maximizar el rendimiento de proteínas y minimizar el uso de productos químicos peligrosos, los costos de aislamiento y la pérdida de material de semilla, la optimización del método de extracción es fundamental. Para algunos estudios, también es necesario minimizar o evitar la contaminación cruzada de semilla a semilla para la fenotipificación y el análisis de un solo tipo de tejido para conocer la cantidad exacta de cualquier componente bioactivo en una sola semilla, en lugar de una mezcla de varias semillas. Sin embargo, no existe un método simple y robusto para la extracción de proteínas de una sola semilla de colza (SRPE). Para establecer una estrategia para optimizar SRPE para el análisis de proteínas basado en gel, obteniendo la mayor cantidad de SSP de la manera más económica y rápida, se probaron una variedad de enfoques diferentes, incluidas variaciones en los pasos de pulverización de semillas, cambios en las composiciones de solventes y reactivos y ajustes a los pasos de recuperación de proteínas. Después de SRPE, se utilizó SDS-PAGE 1D para evaluar la calidad y cantidad de proteínas extraídas. Se desarrolló un procedimiento SRPE estandarizado y luego se probó para el rendimiento y la reproducibilidad. El mayor rendimiento y calidad de proteínas se obtuvieron utilizando un molinillo de bolas con cuentas de acero inoxidable en tubos de microcentrífuga Safe-Lock con metanol como solvente, lo que proporciona un método altamente eficiente, económico y efectivo. La utilidad de este SRPE se validó aplicando el procedimiento para extraer proteínas de diferentes semillas oleaginosas de Brassica y para el cribado de una población mutante de etil metano sulfonato (EMS) de R-0-18. Los resultados proporcionan una metodología útil para identificar y caracterizar las SSP en el SRPE.