La biomasa de microalgas es uno de los criterios cruciales en los estudios de microalgas. Muchos métodos reportados, incluso el protocolo bien establecido para la determinación del peso seco (DW) de microalgas, varían considerablemente, y la evaluación comparativa confiable entre los resultados publicados podría ser problemática. Este estudio tuvo como objetivo determinar la mejor condición de parámetros críticos en la determinación del DW de microalgas marinas para cultivos a escala de laboratorio utilizando cuatro especies diferentes de microalgas marinas. Estos parámetros incluyeron el proceso de lavado, grados de filtro de microfibra de vidrio (GMF), condiciones de pretratamiento de GMF, concentraciones de agente de lavado (formiato de amonio), relaciones de cultivo: agente de lavado (v:v) y ciclos de lavado. El grado de GMF GF/A con precombustión a 450 grados C proporcionó el DW más satisfactorio y la mayor relación de peso seco libre de cenizas (AFDW)/DW. Además, 0.05 M de formiato de amonio con una relación de cultivo: agente de lavado de 1:2 y un mínimo de dos ciclos de lavado parecieron ser la mejor configuración para la determinación del DW de microalgas. El tratamiento presente aumentó la relación AFDW/DW de las cuatro microalgas respectivas en un mínimo del 19%. Los hallazgos de este estudio podrían servir como una referencia fundamental en el desarrollo de un protocolo estandarizado para la determinación del DW de microalgas marinas para obtener un DW de microalgas marinas veraz y confiable.