Los protocolos basados en el disolvente orgánico éter dibencilo (DBE) han sido ampliamente utilizados en el aclaramiento del tejido adiposo. Sin embargo, se ha demostrado que el aclaramiento basado en alcohol bencílico/benzoato de bencilo (BABB) ofrece una mejor transparencia en otros tejidos. La adición de éter difenilo (DPE) a BABB (BABB-D4) suele incluirse para preservar las señales fluorescentes, pero sus efectos en la transparencia y contracción del tejido adiposo no han sido explorados. Subpoblaciones distintas de adipocitos contribuyen a su composición celular y actividad biológica. Aquí, comparamos los disolventes de aclaramiento para crear una metodología de aclaramiento optimizada para el estudio de subpoblaciones de adipocitos. Los tejidos adiposos se aclararon con BABB, BABB-D4 y DBE, y se midió la transparencia post-aclarado y la contracción del tejido. Se creó un protocolo optimizado, que incluye el aclaramiento con BABB-D4, la delipidación y extensos pasos de bloqueo de inmunofluorescencia, para examinar la distribución espacial de los adipocitos derivados de progenitores positivos para Wt-1 (Tipo-1) en la grasa mesentérica intacta. Tanto BABB como BABB-D4 conducen a un aumento significativo de la transparencia del tejido con una contracción reducida del tejido en comparación con el tejido adiposo aclarado con DBE. Los adipocitos Tipo-1 se encuentran en una distribución agrupada con residencia predominante en la grasa asociada al íleon y al colon. Este documento detalla una metodología de aclaramiento optimizada para el tejido adiposo con mayor transparencia del tejido y contracción reducida, y por lo tanto será una herramienta útil para investigar la biología del tejido adiposo.