Antecedentes: Las células musculares lisas vasculares (VSMCs) y las células endoteliales vasculares son participantes clave en la patogénesis de la aterosclerosis. Las células endoteliales de vena umbilical humana (HUVECs) y las VSMCs son modelos útiles para diseñar estrategias terapéuticas para muchas enfermedades cardiovasculares (CVDs). Sin embargo, la obtención de una línea celular de VSMC por parte de los investigadores, para modelar la aterosclerosis, por ejemplo, se ve dificultada por limitaciones de tiempo y costos, así como por muchos otros problemas logísticos en muchos países. Resultados: Este artículo describe un protocolo para el aislamiento rápido y económico de VSMCs de cordones umbilicales humanos utilizando un método mecánico y enzimático. Este protocolo de VSMC produce un cultivo primario confluyente que podría obtenerse en 10 días y subcultivarse durante 8-10 pasajes. Las células aisladas se caracterizan por su morfología y la expresión de ARNm de proteínas marcadoras analizadas por reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa (RT-qPCR). Conclusión: El protocolo descrito aquí para el aislamiento de VSMCs de cordones umbilicales humanos es fácil y eficiente en tiempo y costos. Las células aisladas son modelos útiles para comprender los mecanismos subyacentes a muchas condiciones fisiopatológicas.