Los oligodendrocitos forman mielina en el sistema nervioso central, y su disfunción puede causar síntomas neurológicos graves, ya que análisis a gran escala han destacado numerosas alteraciones en la expresión génica en condiciones patológicas. Aunque los análisis funcionales de genes in vivo son preferibles, tienen varias limitaciones, especialmente en estudios a gran escala. Por lo tanto, se necesitan sistemas in vitro estandarizados para facilitar análisis funcionales eficientes y confiables de genes identificados en dichos estudios. Aquí, describimos un método práctico y eficiente para el aislamiento de células precursoras de oligodendrocitos (OPC) de cerebros de ratones en el día postnatal 6-8 y un método de entrega génica para las OPCs aisladas. Al modificar el procedimiento de separación celular activado magnéticamente (MACS) con volúmenes de procesamiento reducidos, simplificamos el aislamiento de OPCs, lo que permite el manejo simultáneo de múltiples muestras y mejora la eficiencia del flujo de trabajo. También optimizamos los parámetros de electroporación para lograr una eficiencia de transfección robusta con un mínimo de muerte celular. Las OPCs transfecadas son adecuadas tanto para ensayos de diferenciación en monocultivo como para la co-cultura con explantes de ganglios de raíces dorsales (DRG), en los que se diferencian de manera confiable en oligodendrocitos maduros y mielinizan a lo largo de los axones. Este sistema permite un análisis estable y reproducible in vitro de la función de los oligodendrocitos, apoya investigaciones tanto en la diferenciación intrínseca como en las interacciones neurona-glía, y proporciona una plataforma poderosa para la investigación de oligodendrocitos con manipulación génica eficiente y oportuna.