La aplicación de medicamentos intracanal puede afectar las propiedades físicas de la dentina radicular. El hidróxido de calcio (CH), un medicamento intracanal de referencia, ha demostrado disminuir la microdureza de la dentina radicular. Un extracto natural, el propóleos, ha demostrado ser superior al CH en la erradicación de microbios endodónticos, pero su efecto sobre la microdureza de la dentina radicular aún no se conoce. Esta investigación tiene como objetivo evaluar el efecto del propóleos sobre la microdureza de la dentina radicular en comparación con el hidróxido de calcio. Noventa discos radiculares fueron divididos aleatoriamente en tres grupos y tratados con CH, propóleos y un control. Se utilizó una máquina de indentación de dureza Vickers con una carga de 200 g y un tiempo de permanencia de 15 s a 24 h, 3 y 7 días para la prueba de microdureza. Se utilizaron ANOVA y la prueba post hoc de Tukey para el análisis estadístico. Se observó una disminución progresiva en los valores de microdureza en el CH (< 0.01), mientras que se observó un aumento progresivo en el grupo de propóleos (< 0.01). A los 7 días, el propóleos demostró el valor de microdureza más alto (64.43 +/- 1.69), mientras que el CH demostró el valor más bajo (48.46 +/- 1.60). La microdureza de la dentina radicular aumentó con el tiempo cuando se aplicó propóleos, mientras que disminuyó con el tiempo después de la aplicación de CH en secciones de dentina radicular.