El género Alyssum, con sus muchas especies adaptadas a metales, es un buen candidato para la investigación sobre fitoremediación y mecanismos de tolerancia a metales. Estos objetivos pueden ser respaldados mediante la elaboración de un protocolo de multiplicación in vitro. Nuestro estudio tuvo como objetivo determinar las condiciones asépticas para el crecimiento y la propagación efectiva de , , y , cada una exhibiendo diferentes estrategias de adaptación a los iones de níquel. En primer lugar, se investigaron el peróxido de hidrógeno (HO) o el nitroprusiato de sodio (SNP) en la prueba biológica de Lepidium para encontrar sus concentraciones óptimas que pudieran mejorar los atributos de germinación de las especies de Alyssum probadas. Se seleccionó la concentración de 0.5 mM de HO o SNP para la investigación sobre semillas de Alyssum, que fueron el material inicial para comenzar el cultivo in vitro. Independientemente de la especie, el HO perjudicó el porcentaje de germinación; sin embargo, su aplicación aceleró la emergencia de la raíz, especialmente en genotipos sensibles a metales, mientras que en ambos genotipos tolerantes a metales, el tiempo de germinación de las semillas tratadas con HO fue similar al de las tratadas con SNP. Estos hallazgos proporcionan una nueva perspectiva sobre el efecto de HO o SNP en las semillas, contribuyendo a una mejor comprensión de su papel en la germinación de diferentes genotipos. Entre las composiciones de medios probadas, se logró la regeneración sincronizada de plantas de todas las especies en medio MS suplementado con 0.5 mg/L de 2iP y 0.1 mg/L de IAA, lo que representa un avance esencial en los protocolos in vitro para metalófitos.