Las células madre germinales masculinas (mGSCs), también conocidas como células madre espermatogoniales (SSCs), son las células semilla fundamentales de la fisiología reproductiva de los animales machos. Sin embargo, las influencias ambientales, los medicamentos y las sustancias nocivas a menudo representan desafíos para las SSCs, como la reducción de la población y el deterioro de la calidad. Con los avances en la tecnología de bioingeniería y la tecnología de biomateriales, se han empleado un número creciente de nuevos métodos y técnicas de cultivo celular para estudiar la proliferación y diferenciación de las SSCs. Este artículo proporciona una revisión sobre los avances recientes en técnicas de cultivo en 3D para las SSCs; resumimos el microentorno de las SSCs y el desarrollo de espermatocitos, con un enfoque en los métodos de cultivo basados en andamios y las técnicas de cultivo celular mediante impresión 3D para las SSCs. Además, se utilizan matrices testiculares desacelularizadas (DTM) y otros sustratos biológicos a través de diversas combinaciones y enfoques para construir un microentorno de cultivo adecuado para el crecimiento de las SSCs. Finalmente, presentamos algunas perspectivas sobre las tendencias actuales de investigación y las oportunidades potenciales en tres áreas: el entorno de nicho de impresión 3D, opciones alternativas para la utilización de DTM y el avance del sistema de tecnología de cultivo de SSC.