Caracterizados por su estructura covalentemente cerrada y, por lo tanto, una estabilidad elevada en comparación con las moléculas de ARN lineales, los ARN circulares (circRNAs) forman una nueva clase de ARN principalmente no codificantes. Aunque las funciones biológicas de los circRNAs de origen natural son en su mayoría desconocidas, se informó que actúan como esponjas moleculares, secuestrando microARNs (miARNs), lo que resulta en una desrepresión de los ARNm objetivo. Teniendo en cuenta estas características de los circRNAs de origen natural, los circRNAs artificiales podrían ser una herramienta potencial en biología molecular y medicina. Utilizando el virus de la hepatitis C (VHC) como sistema modelo, se demostró esta aplicación de los ARN circulares artificiales. El virus requiere el miARN celular miR-122 para su ciclo de vida, y los circRNAs específicamente diseñados para secuestrar eficientemente este miARN afectaron la propagación viral. Dado que en este contexto la producción de circRNA diseñado sigue siendo el factor limitante, presentamos un método para producir y purificar eficientemente las esponjas de ARN circulares artificiales (ciRS). En este protocolo, proporcionamos información sobre una técnica de producción a pequeña y gran escala de esponjas de ARN circulares artificiales que dependen de la transcripción y la ligación de ARN.