El suero de queso (CW) puede ser una excelente fuente de carbono para las bacterias productoras de polihidroxialcanoatos (PHA). La mayoría de los estudios han utilizado CW, que contiene altas cantidades de lactosa, sin embargo, no hay informes que utilicen CW crudo, que tiene una cantidad relativamente baja de lactosa. Por lo tanto, en el presente estudio, se evaluó la producción de PHA en un proceso de dos etapas utilizando el CW que contiene bajas cantidades de lactosa. En la primera etapa, la fuente de carbono presente en CW se convirtió en ácido acético utilizando la bacteria C1, que fue aislada de residuos de alimentos. En la segunda etapa, el ácido acético producido en la primera etapa se convirtió en PHA utilizando la bacteria sp. CYR-1. Bajo la condición sin el pretratamiento de CW, el ácido acético producido a partir de CW se diluyó en diferentes proporciones y se utilizó para la producción de PHA. La cepa CYR-1 incubada con CW diluido diez veces que contenía 5,7 g/L de ácido acético mostró una mayor producción de PHA (240,6 mg/L), mientras que la cepa CYR-1 incubada con CW diluido cuatro veces que contenía 12,3 g/L de ácido acético mostró 126 mg/L de PHA. Después de remover la proteína en exceso presente en CW, la producción de PHA se incrementó aún más en 3,26 veces (411 mg/L) con una dilución de cuatro veces que contenía 11,3 g/L de ácido acético. Basándose en el espectroscopio infrarrojo por transformada de Fourier (FT-IR) y los análisis de resonancia magnética nuclear de hidrógeno y carbono (NMR), se confirmó que el PHA producido a partir del proceso de dos etapas es poli-beta-hidroxibutirato (PHB). Todas las bandas que aparecen en el espectro FT-IR y los desplazamientos químicos de NMR coinciden casi con los del PHB estándar. Basándose en estos estudios, concluimos que un proceso de dos etapas utilizando C1 y sp. CYR-1 sería aplicable para la producción de PHB utilizando CW que contiene una baja cantidad de lactosa.