El -tagatosa es un monosacárido funcional popular producido a partir de lactosa por beta-galactosidasa e isomerasa de arabinosa. En este estudio, se construyeron dos sistemas de expresión génica heterólogos deficientes en -alanina, 168 D1 y 168 D2, utilizando PCR de extensión superpuesta y el sistema CRE/. El gen de beta-galactosidasa se integró en un locus específico del chasis 168 D2. Se construyó un plásmido mutuamente complementario pMA5 con el gen de racemasa de alanina adjunto, que se utilizó para ensamblar plásmidos recombinantes que sobreexpresan beta-galactosidasa e isomerasa de arabinosa. Posteriormente, se construyó un recombinante integrado mediante el plásmido que expresa el gen de isomerasa de arabinosa en células 168 D2 competentes para la transformación. Los plásmidos de coexpresión se introdujeron en 168 D1 con knockout de racemasa de alanina. Se realizó una bioconversión de células completas utilizando el recombinante integrado con un rendimiento máximo de 96.8 g/L de -tagatosa a partir de 500 g/L de lactosa, y las conversiones molares más altas fueron del 57.2%. 168 D1/pMA5-- es capaz de producir -tagatosa en un solo paso y en una sola célula. Este estudio proporciona un nuevo enfoque para la producción de azúcares funcionales.