Con el fin de aumentar la tolerancia de las plantas a la sequía, se está considerando la idea de tratarlas con compuestos que protegen contra el estrés de manera exógena. En este estudio, nuestro objetivo fue evaluar y comparar el impacto del calcio exógeno, la prolina y los probióticos vegetales en la respuesta del trigo de invierno al estrés por sequía. La investigación se llevó a cabo en condiciones controladas, simulando una sequía prolongada de 6 a 18 días. Las plántulas fueron tratadas con ProbioHumus 2 uL g para la priming de semillas, 1 mL en 100 mL para el rociado de plántulas, y prolina 1 mM según el esquema. Se añadieron 70 g de CaCO al suelo. Todos los compuestos probados mejoraron la tolerancia al estrés por sequía prolongada del trigo de invierno. ProbioHumus y ProbioHumus + Ca tuvieron el mayor efecto en el mantenimiento del contenido relativo de agua en las hojas (RWC) y en el mantenimiento de parámetros de crecimiento cercanos a los de las plantas irrigadas. Retrasaron y redujeron la estimulación de la emisión de etileno en las hojas estresadas por sequía. Las plántulas tratadas con ProbioHumus y ProbioHumus + Ca presentaron un grado significativamente menor de daño en la membrana inducido por ROS. Estudios moleculares de genes responsables de la respuesta a la sequía revelaron una expresión sustancialmente más baja en plantas tratadas con Ca y probióticos + Ca en comparación con el control de sequía. Los resultados de este estudio mostraron que el uso de probióticos en combinación con Ca puede activar reacciones de defensa que pueden compensar los efectos adversos del estrés por sequía.