Las orquídeas de vainilla son miembros de la subfamilia de orquídeas Vanilloideae y tienen un valor económico significativo como cultivo de especias en regiones tropicales. A pesar de la presencia de 180 especies conocidas dentro de esta subfamilia, la producción comercial se centra en solo tres especies y un híbrido, valorados por sus cualidades aromáticas y compuestos bioactivos. Se han llevado a cabo iniciativas de cría modernas limitadas con orquídeas de vainilla, aunque los recientes avances en la investigación genómica están arrojando luz sobre el potencial de este cultivo. El prolongado ciclo de cría de la vainilla, junto con la creciente demanda de germoplasma, subraya la importancia de los esfuerzos de investigación y cría en la vainilla. Este documento describe un protocolo para la producción haploide utilizando ovarios no fertilizados en condiciones de cultivo de tejidos. Además, presentamos una metodología para confirmar la naturaleza haploide de las líneas haploides putativas a través de la comparación del tamaño estomático, el conteo de cromosomas y el análisis de citometría de flujo, demostrando el desarrollo exitoso de plantas de vainilla haploides. Estos hallazgos contribuyen al avance de los programas de cría y estrategias de mejora genética para la industria de la vainilla.