El gato montés y el lince ibérico son especies importantes en España, consideradas como casi amenazadas y en peligro de extinción, respectivamente. Ambos pueden ser infectados por un parásito que puede causar morbilidad y mortalidad en mamíferos infectados transplacentariamente o inmunocomprometidos. Los datos sobre la prevalencia de este parásito en poblaciones silvestres de estas especies en España están desactualizados. El objetivo de este estudio fue actualizar la información y evaluar el papel de estos felinos en la epidemiología del parásito y el impacto potencial del parásito en su conservación. Se recolectaron muestras de sangre y heces de animales capturados, así como la lengua, el diafragma y el bazo de animales muertos en accidentes de tráfico en el centro de España. Se utilizó una prueba de anticuerpos fluorescentes indirectos (IFAT) para detectar anticuerpos del parásito en suero, se utilizaron microscopía y análisis molecular para detectar ooquistes en heces, y se utilizó análisis molecular para determinar la existencia de quistes tisulares. La seroprevalencia fue del 85% en gatos monteses y del 45% en linces, y se detectó ADN del parásito en las heces de un gato montés y en muestras de tejido de 10 gatos monteses y 11 linces ibéricos. Estos resultados destacan la importancia epidemiológica y el alto riesgo de infección en animales y humanos en las áreas estudiadas. Considerando la susceptibilidad de los felinos a la infección, se necesitan programas de monitoreo para evaluar el estado de salud de los felinos silvestres.