El pretratamiento de lignocelulosa con líquidos iónicos (IL) es un método eficiente para mejorar la sacarificación enzimática. Sin embargo, los residuos restantes de IL desactivan la celulasa, por lo que es necesario un lavado intensivo de biomasa después del pretratamiento. Este estudio tuvo como objetivo desarrollar un proceso de una sola etapa que combine el pretratamiento con IL y la sacarificación enzimática utilizando acetato de colina de baja toxicidad ([Ch][OAc]) y celulasas bacterianas tolerantes a IL. Las celulasas crudas producidas a partir de suelos salinos habitados por las especies CBD2 y CBD3 se probaron bajo la influencia de 0.5-2.0 M [Ch][OAc], lo que mostró que sus actividades se mantuvieron en más del 95%. Sin embargo, [Ch][OAc] resultó tóxico para las culturas de CBD2 y CBD3, en las cuales solo el 32.85% y el 12.88% estaban vivos a 0.5 M [Ch][OAc]. Según las actividades enzimáticas específicas, las cantidades de azúcar producidas a partir de procesos de una sola etapa utilizando 1 mg de CBD2 y CBD3 fueron mayores que las de Celluclast 1.5 L en 2.0 y 4.5 veces, respectivamente, lo que sugiere su potencial para una mayor aplicación en el proceso de biorrefinación de productos de valor agregado.