Las matrices desacelularizadas pueden reducir eficazmente el rechazo inmunológico severo con sus células y eliminar el material de ácido nucleico, proporcionando entornos específicos para la reparación o regeneración de tejidos. En este estudio, preparamos polvo de matriz de cartílago acelular (ACM) a través del método de desacelularización y desarrollamos hidrogeles de ACM mediante métodos de digestión física, química y enzimática. Los resultados demostraron que el grupo de tamaño pequeño de hidrogeles de ACM exhibió mejores condiciones de gel cuando la concentración de los hidrogeles de ACM fue de 30 y 20 mg/mL en HCl 1N a través del ajuste de parámetros. Los datos también confirmaron que los hidrogeles de ACM retuvieron los componentes principales del cartílago: 61.18% de glicosaminoglicanos (GAG) y 78.29% de colágeno, con un 99.61% de su ADN eliminado en comparación con muestras sin el procedimiento de desacelularización (establecido como 100%). A través de la cinética de gelación turbidimétrica, el análisis de propiedades reológicas de los hidrogeles y la prueba de propiedades físicas del tejido de los hidrogeles, este estudio también reveló que aumentar la concentración de los hidrogeles es útil para la gelación. Además, la prueba ex vivo confirmó que una mayor concentración de hidrogeles de ACM tenía buenas propiedades adhesivas y podía llenar adecuadamente los defectos de cartílago. Este estudio ofrece información útil para el desarrollo y fabricación de hidrogeles de ACM que sirvan como andamios alternativos potenciales para el tratamiento de defectos de cartílago en el futuro.