Un método simple y fácil de usar para la preparación de granos de polen de alta calidad para microscopía electrónica de barrido (SEM)
Autores: Ermolaev, Aleksey; Mardini, Majd; Buravkov, Sergey; Kudryavtseva, Natalya; Khrustaleva, Ludmila
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2024
Acceso abierto
Artículo científico
2024
Un método simple y fácil de usar para la preparación de granos de polen de alta calidad para microscopía electrónica de barrido (SEM)
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Botánica
Palabras clave
Polen
Microscopía electrónica de barrido
Ingeniería genética
Mejoramiento de plantas
Monitoreo ambiental
Apertura
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 12
Citaciones: Sin citaciones
El polen se está convirtiendo en un tema cada vez más importante para los investigadores moleculares en ingeniería genética, mejoramiento de plantas y monitoreo ambiental. Para ampliar el alcance de estos estudios, es esencial desarrollar métodos accesibles para científicos que no están especializados en palinología. El artículo presenta un procedimiento técnico simplificado para preparar granos de polen para microscopía electrónica de barrido (SEM). El protocolo es conveniente para cualquier laboratorio molecular debido a su pequeño conjunto de reactivos, facilidad de ejecución, bajo costo, no requiere equipo especial y solo toma una hora para completarse. La alta capacidad de penetración del formaldehído y la delicada deshidratación final utilizando hexametildisilazano (HMDS) en lugar de secado en punto crítico permiten una preservación suficiente de la arquitectura de la apertura, que se considera una puerta de entrada para el paso de biomoléculas. El método se aplicó con éxito a granos de polen de representantes de dicotiledóneas (remolacha, petunia, rábano, tomate y tabaco) y monocotiledóneas (lirio, cebolla, maíz, centeno y trigo). Las especies estudiadas incluyeron especies polinizadas por insectos (entomófilas) y especies polinizadas por el viento (anemófilas). Un análisis comparativo de los tamaños de los granos de polen vivos frescos bajo un microscopio de luz y aquellos preparados para SEM mostró cierta contracción. El análisis cuantitativo del grado de contracción de los granos de polen mostró que este proceso depende de la forma inicial de los granos de polen secos y del número y estructura de las aperturas. Los resultados respaldan el modelo teórico de las rutas de plegado/desplegado de los granos de polen.
Descripción
El polen se está convirtiendo en un tema cada vez más importante para los investigadores moleculares en ingeniería genética, mejoramiento de plantas y monitoreo ambiental. Para ampliar el alcance de estos estudios, es esencial desarrollar métodos accesibles para científicos que no están especializados en palinología. El artículo presenta un procedimiento técnico simplificado para preparar granos de polen para microscopía electrónica de barrido (SEM). El protocolo es conveniente para cualquier laboratorio molecular debido a su pequeño conjunto de reactivos, facilidad de ejecución, bajo costo, no requiere equipo especial y solo toma una hora para completarse. La alta capacidad de penetración del formaldehído y la delicada deshidratación final utilizando hexametildisilazano (HMDS) en lugar de secado en punto crítico permiten una preservación suficiente de la arquitectura de la apertura, que se considera una puerta de entrada para el paso de biomoléculas. El método se aplicó con éxito a granos de polen de representantes de dicotiledóneas (remolacha, petunia, rábano, tomate y tabaco) y monocotiledóneas (lirio, cebolla, maíz, centeno y trigo). Las especies estudiadas incluyeron especies polinizadas por insectos (entomófilas) y especies polinizadas por el viento (anemófilas). Un análisis comparativo de los tamaños de los granos de polen vivos frescos bajo un microscopio de luz y aquellos preparados para SEM mostró cierta contracción. El análisis cuantitativo del grado de contracción de los granos de polen mostró que este proceso depende de la forma inicial de los granos de polen secos y del número y estructura de las aperturas. Los resultados respaldan el modelo teórico de las rutas de plegado/desplegado de los granos de polen.