Los glucocorticoides se han utilizado comúnmente en el tratamiento de la inflamación y enfermedades mediadas por el sistema inmunológico en seres humanos y animales pequeños como gatos y perros. Sin embargo, el uso excesivo puede llevar al síndrome de Cushing junto con varias enfermedades trombóticas y cardiovasculares. Aunque se sabe que los glucocorticoides ejercen un efecto significativo en la coagulación, el efecto del cortisol en la función plaquetaria es mucho menos claro. Por lo tanto, nuestro objetivo fue estudiar los efectos de la prednisona, uno de los glucocorticoides comúnmente utilizados, en la regulación de la función plaquetaria utilizando plaquetas murinas. Primero evaluamos el efecto dependiente de la concentración de la prednisona en la función plaquetaria inducida por 2-MeSADP y encontramos que la ola secundaria de agregación inducida por 2-MeSADP y la secreción de gránulos densos fueron completamente inhibidas a partir de 500 nM de prednisona. Dado que la secreción inducida por 2-MeSADP y la consiguiente ola secundaria de agregación son mediadas por la generación de TxA, este resultado sugiere un papel de la prednisona en la generación de TxA en plaquetas. De manera consistente, la prednisona no afectó la agregación inducida por 2-MeSADP en plaquetas aspirinizadas, donde la ola secundaria de agregación y secreción fueron bloqueadas al eliminar la contribución de la generación de TxA por la aspirina. Además, la agregación y secreción de plaquetas inducidas por trombina fueron inhibidas en presencia de prednisona al inhibir el efecto de retroalimentación positiva de la generación de TxA en la función plaquetaria. Además, la prednisona inhibió completamente la generación de TxA inducida por 2-MeSADP, confirmando el papel de la prednisona en la generación de TxA. Finalmente, el análisis de Western blot reveló que la prednisona inhibió significativamente la fosforilación de la fosfolipasa A citosólica (cPLA) y de ERK inducida por 2-MeSADP en plaquetas no aspirinizadas, mientras que solo la fosforilación de cPLA, pero no la fosforilación de ERK, fue significativamente inhibida por la prednisona en plaquetas aspirinizadas. En conclusión, la prednisona afecta la función plaquetaria mediante la inhibición de la generación de TxA a través de la regulación de la fosforilación de cPLA, arrojando luz sobre su caracterización clínica y eficacia en el tratamiento de perros con hipercortisolismo en el futuro.