La determinación de la mineralización de nitrógeno orgánico (N) es crucial para estimar la disponibilidad de N, cuantificar los aportes exógenos y estimar los impactos ambientales asociados. El objetivo de este estudio fue explorar el efecto de la fertilización a largo plazo en el potencial de mineralización de N orgánico del suelo (NMP), que influye en la accesibilidad del N para las plantas. Los tratamientos de un experimento de campo a largo plazo de 26 años sin fertilización (CK), fertilizante químico N a 165 kg N ha y P a 82.5 kg PO ha (NP), NP con fertilizante K a 165, 82.5, 82.5 kg ha N, PO y KO (NPK), NPK a 165, 82.5, 82.5 kg ha N, PO y KO con estiércol a 7857.14 kg ha (NPKM), y NPKM a 165, 82.5, 82.5 kg ha N, PO y KO con estiércol a una tasa de aplicación de 1.5x (11,785.71 kg ha) (1.5NPKM) se examinaron para determinar el N potencialmente mineralizable mediante incubación aeróbica a 35 grados Celsius durante 30 semanas. Se reconocieron tres grupos (Grupos I, II y III) de N mineralizable. Grupo I, el aumento de mineralización al rehumedecer en las primeras 2 semanas; Grupo II, mineralización bruta de N entre las semanas 2 y 30; y Grupo III, el N potencialmente mineralizable, predicho a partir de la curva ajustada, que no se mineralizó durante el período de incubación. También se estudiaron el carbono de la biomasa microbiana del suelo (SMBC) y el N (SMBN), así como los contenidos de amonio fijo (NH) y la relación con la tasa de mineralización de N (). La aplicación a largo plazo de estiércol produjo un (0.32 semana) significativamente mayor que otros tratamientos (0.12-0.22 semana) pero no un NMP significativamente mayor. Se predijo que la mineralización de nitrógeno durante las temporadas de cultivo de trigo y maíz sería de 8.7-26.3 (mg N kg suelo) y 25.9-42.1 (mg N kg suelo), respectivamente. Ambos grupos de N mineralizable lábil (Grupos I y II) siguieron los mismos patrones en los tratamientos: 1.5NPKM > NPKM > NPK > NP > CK, mientras que lo contrario fue cierto para el N estable (Grupo III). La correlación positiva significativa entre con SMBC y SMBN (R = 0.93, = 0.008 y R = 0.94, = 0.006) sugirió que la tasa de mineralización más alta podría ser contribuida por la mayor biomasa microbiana del suelo en NPKM. Las tendencias de NH fijo y N mineralizado estuvieron acopladas. La aplicación a largo plazo de estiércol mejoró significativamente la tasa de mineralización de N en el suelo. La aplicación de estiércol es una estrategia efectiva para mejorar la biomasa microbiana del suelo y la disponibilidad de N en el suelo, y tiene el potencial de reducir la dependencia de la fertilización química con N.