En este estudio, se detectaron seis SNPs (UTR-(-127) C>A, UTR-(-105) T>A, UTR-(-87) G>A, I1-763 G>T, E2-77 G>A, E2-127 G>T) en el gen IFI27 en una población de vacas Holstein chinas. Además, el análisis de asociación del polimorfismo de IFI27 y los rasgos de calidad de la leche mostró que los genotipos AG y GG de E2-77 G>A, y los genotipos GG y TT de E2-127 G>T estaban relacionados con la grasa de la leche. El análisis de frecuencia de haplotipos mostró que los individuos con un genotipo H5H6 producían un mayor contenido de grasa en la leche que aquellos con una combinación de haplotipos H5H5. Además, la sobreexpresión del gen IFI27 en células epiteliales mamarias bovinas causó un aumento significativo en el contenido de triglicéridos y una disminución en el contenido de colesterol y ácidos grasos no esterificados, mientras que la interferencia con la expresión de IFI27 produjo cambios opuestos. Estos resultados proporcionan una referencia para la selección de rasgos de grasa en la leche en la cría de ganado lechero y sientan las bases para una investigación más profunda de la función del gen IFI27 en el metabolismo de la grasa de la leche.