El calentamiento global tiene un impacto significativo en la industria de la producción de lácteos, ya que el estrés térmico causa desequilibrios endocrinos reproductivos y conduce a pérdidas económicas sustanciales, particularmente en regiones tropicales y subtropicales. La raza Holstein, que se utiliza ampliamente para la producción de lácteos, es altamente susceptible al estrés térmico, lo que resulta en una reducción dramática en la producción de leche durante las temporadas calurosas. Sin embargo, estudios anteriores han demostrado que las células de vacas producidas a partir de embriones reconstruidos que contienen citoplasma de ganado amarillo de Taiwán tienen una mejor termotolerancia a pesar de que sus núcleos provienen de ganado Holstein sensible al calor. Utilizando la tecnología de transferencia de huso, producimos con éxito ganado ST-Yo-Hn y demostramos que la termotolerancia de sus fibroblastos auriculares es similar a la de los de ganado amarillo y significativamente mejor que la de los Holstein. A pesar de estos hallazgos, los genes y moléculas responsables de las diferentes sensibilidades de las células derivadas de ganado ST-Yo-Hn y Holstein no han sido investigados extensamente. En el presente estudio, se aislaron fibroblastos auriculares de ganado ST-Yo-Hn y Holstein, y se compararon los perfiles de proteínas y genes expresados diferencialmente con o sin estrés térmico. Los resultados revelaron que los niveles de expresión relativa de proteínas pro-apoptóticas, incluyendo Caspasa-3, -8 y -9, en los fibroblastos auriculares del grupo ST-Yo-Hn-hs eran significativamente más bajos que los del grupo H-hs. Por el contrario, los niveles de expresión relativa de factores anti-apoptóticos, incluyendo la proteína GNA14 y los genes correspondientes, eran significativamente más altos en los fibroblastos auriculares del grupo ST-Yo-Hn-hs en comparación con los del grupo H-hs. El análisis de factores relacionados con la fosforilación oxidativa reveló que los niveles de expresión relativa del gen y las proteínas Complejo-I, Complejo-IV, CAT y PGLS eran significativamente más altos en los fibroblastos auriculares del grupo ST-Yo-Hn-hs en comparación con los del grupo H-hs. En conjunto, estos hallazgos sugieren que los fibroblastos auriculares de ganado ST-Yo-Hn tienen una termotolerancia superior en comparación con los de ganado Holstein debido a su menor expresión de factores pro-apoptóticos y mayor expresión de factores de fosforilación oxidativa y antioxidantes. Además, esta mejor termotolerancia se atribuye, al menos en parte, al citoplasma derivado de ganado Y más tolerante al calor. Por lo tanto, utilizar la tecnología de transferencia de huso para producir ganado Holstein más tolerante al calor que contenga citoplasma de ganado Y podría ser un enfoque viable para aliviar los impactos negativos del estrés térmico en el ganado lechero en regiones tropicales y subtropicales.