es un patógeno bacteriano toxigénico de varias especies de pasto y es responsable de muertes masivas de ganado en Australia y Sudáfrica. Debido a la preocupación por la salud animal y las industrias ganaderas, fue designado como un Agente Selecto de EE. UU. Se diseñó un método de detección rápido, preciso y sensible en el campo para ayudar en las encuestas de vigilancia de bioseguridad y apoyar la certificación de exportación de heno y semillas de pasto de centeno anual. Se exploraron genomas completos de todas las poblaciones conocidas, se identificaron secuencias diagnósticas únicas y se diseñaron cebadores específicos para el objetivo y una sonda para la amplificación de polimerasa recombinasa (RPA) y PCR de punto final. La reacción de RPA se realizó a 37 grados C y se utilizó un dispositivo de flujo lateral (LFD) para visualizar los productos amplificados. Para mejorar la fiabilidad y precisión, también se diseñaron cebadores y sondas para detectar porciones de las regiones ITS del hospedador. La especificidad y sensibilidad del ensayo RPA se compararon con la PCR de punto final utilizando paneles de inclusividad y exclusividad apropiados. La sensibilidad del ensayo RPA (10 fg) fue 10 veces más sensible que la PCR de punto final con y sin un fondo de ADN del hospedador. En pruebas comparativas, el ensayo RPA no se vio afectado por inhibidores de amplificación derivados de plantas, a diferencia de los ensayos LAMP y PCR de punto final. La validación en campo del ensayo RPA en múltiples sitios en Australia del Sur confirmó la eficiencia, especificidad y aplicabilidad del ensayo RPA. El ensayo RPA apoyará la gestión de enfermedades y decisiones de bioseguridad en campo basadas en evidencia.