El virus del mosaico del trigo (TriMV) y el virus de las tierras altas (HPV), identificados recientemente, han sido considerados entre los principales virus que afectan al trigo. Transportados por el mismo vector, el ácaro del rizado del trigo, ambos de estos virus causan amarillamiento y enanismo de las plantas que son muy similares a muchos otros virus que atacan al trigo. Esto hace que sea difícil detectar estos virus en diferentes líneas de trigo, planteando un problema importante en el rendimiento. Este documento destaca la adición de estos dos virus a un método basado en multiplex RT-PCR que ya detectaba la presencia de los virus de la cebada y de los enanismos amarillos de los cereales (B/CYDVs), el virus del mosaico del trigo transmitido por el suelo (SBWMV), el virus del mosaico de la espiga del trigo (WSSMV) y el virus del mosaico en franjas del trigo (WSMV). El método utiliza conjuntos específicos de cebadores que detectan los virus TriMV y HPV objetivo a 560 pb y 490 pb, respectivamente, en presencia de otros virus distintos como B/CYDVs -PAV, -MAV, -SGV, -RPV, -RMV, WSSMV, SBWMV y WSMV a 295, 175, 237, 400, 365, 154, 219 y 193 pb, respectivamente. El cebador hacia adelante para cada virus específico fue etiquetado fluorescentemente para detectarlo de manera más eficiente en la electroforesis capilar. Los diez virus pueden ser vistos como picos en un electroferograma de la electroforesis capilar correspondiente a sus tamaños de producto en pares de bases. Este avance en el protocolo permite la detección de los diez virus del trigo en una sola prueba, mejorando así la capacidad de diagnóstico con solo un ligero aumento en el costo.