Las enfermedades de la corona y la pudrición de raíces de fresa son causadas por patógenos del suelo, incluidos () y (). Los síntomas causados por estos patógenos son muy similares y difíciles de distinguir, y los métodos de detección basados en cultivos tradicionales son laboriosos, consumen mucho tiempo y son lentos para proporcionar resultados. En este trabajo, desarrollamos un ensayo de PCR-NALFIA dúplex utilizando dos pares de cebadores específicos de especie etiquetados en el extremo 5 con diferentes moléculas para la identificación simultánea de y . Para el ensayo de NALFIA, se utilizó un dispositivo de flujo lateral (LFD) para la detección de dos analitos. El método fue desarrollado mediante PCR simple y dúplex (, , + ) utilizando sistemas biológicos cada vez más complejos: (i) ADN de cultivos puros de los patógenos; (ii) ADN de tallos de melón cortados inoculados artificialmente; y (iii) ADN de plantas de fresa cv. Aromas inoculadas artificialmente. El protocolo de PCR dúplex fue efectivo para detectar los dos patógenos en tejidos de melón y proporcionó buenos resultados con tejidos de corona de fresa solo cuando las muestras de ADN fueron purificadas para eliminar los inhibidores de PCR. Los amplicones se utilizaron tanto para electroforesis en gel de agarosa (AGE) como para ensayos de NALFIA y demostraron la mayor sensibilidad del ensayo de NALFIA (10 pg) para la detección simultánea de los dos patógenos.