es un organismo modelo ideal para investigar los mecanismos de transporte de nitrógeno (N) debido a sus bajos requisitos de entrada de N. La cuantificación precisa de la expresión génica es esencial para elucidar estos procesos, siendo la PCR cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR) el método preferido. Sin embargo, la identificación de genes de referencia estables para la normalización bajo diversas condiciones de N sigue sin resolverse. En este estudio, se evaluaron trece genes de referencia candidatos comúnmente empleados en tejidos de raíz, tallo y hoja, bajo cuatro tratamientos de N (NHNO, NH, NO y deficiencia de N). Se excluyeron cinco genes debido a una mala eficiencia de amplificación o curvas de fusión irregulares. Los ocho genes restantes se evaluaron más a fondo por su estabilidad de expresión utilizando los algoritmos geNorm, NormFinder y BestKeeper. El ranking integrado a través de RefFinder identificó a los genes como los más estables. El análisis de GeNorm sugirió que dos genes de referencia eran suficientes para una normalización confiable. La validación utilizando el gen sensible al N confirmó la estabilidad de los genes como adecuados para referencia. Basado en evaluaciones de estabilidad exhaustivas y validación experimental, recomendamos como pares de genes de referencia óptimos para la normalización de RT-qPCR bajo diversas condiciones de N. Además, la expresión consistente de los genes en nueve genotipos de sauce destacó su aplicabilidad más amplia dentro de las especies. Este estudio proporciona una valiosa guía metodológica para avanzar en la investigación molecular sobre el transporte de N en plantas leñosas perennes.