Los fragmentos de unión a antígenos (Fabs) utilizados en investigación (por ejemplo, miméticos de anticuerpos, conjugados de fármacos con anticuerpos, anticuerpos biespecíficos) se obtienen frecuentemente mediante la digestión enzimática de anticuerpos monoclonales utilizando papaina inmovilizada. A pesar de obtener Fabs puros, el uso de papaina inmovilizada para digerir IgG tiene limitaciones, principalmente un tiempo de digestión lento (más de 8 h), alto costo y escasa escalabilidad. Aquí informamos un método rápido y rentable para producir Fabs puros, activos y estables utilizando papaina soluble. La digestión a gran escala de laboratorio de un anticuerpo (100 mg) se logró utilizando papaina soluble con un tiempo de digestión de 30 min y rendimientos aislados del 55-60%. Los Fabs obtenidos mostraron una actividad de unión similar a la de los Fabs preparados mediante digestión con papaina inmovilizada. Se llevó a cabo una conjugación específica entre sitios entre Fabs y polietilenglicol (PEG) para obtener miméticos de anticuerpos FpF (Fab-PEG-Fab), lo que indica que el enlace disulfuro nativo se había conservado. La resonancia de plasmón superficial (SPR) de los FpFs preparados mostró que la actividad de unión al antígeno previsto se mantenía. Anticipamos que este trabajo proporcionará un método rápido y menos costoso para que los investigadores produzcan fragmentos de anticuerpos a gran escala a partir de IgG completa, adecuados para su uso en investigación.