La proteína ALBINO3 (ALB3) funciona en la inserción y ensamblaje de complejos de proteínas de la membrana tilacoide y juega un papel crítico en el desarrollo de los cloroplastos. Sin embargo, la función biológica de los homólogos de ALB3 en arroz, OsALB3, sigue siendo elusiva. Aquí, identificamos un mutante de arroz que mostraba hojas amarillas y moría en la etapa de plántula. El contenido de clorofila en este mutante, en comparación con el tipo salvaje, se redujo significativamente. La observación mediante microscopía electrónica de transmisión muestra que el cloroplasto carece de membranas tilacoides. La mutación causal, que se encuentra en este mutante, fue aislada mediante Mutmap+ combinado con un proceso simple de filtrado de mutaciones. La eliminación de este gen conduce a hojas amarillas y letalidad en plántulas, imitando el fenotipo del mutante. Este gen se expresa ampliamente y OsALB3 está localizado en los cloroplastos. Además, el contenido de proteínas de unión a clorofila de captura de luz en este mutante está reducido. En conjunto, nuestro estudio demostró el papel esencial de OsALB3 en el desarrollo de cloroplastos y proporcionó pistas sobre la posible función molecular conservada de ALB3 en arroz.